传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿(瓶)内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
传代培养中的细胞传代培养(subculture)，当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
[实验步骤]
准备工作：
1)肥皂洗手，在进行无菌操作前，用75% 的酒精擦拭双手，注意指间，和指甲周围。同时，用酒精棉球擦拭超净台。上海创赛科技提供95%药用酒精，Alcohol(95%)，药用级，64-17-5，商品编号：C16-A11087-500ml，价格25元。
2)将培养液放置室温，备用。
3)打开超净台内的紫外灯，照射20 min。同时，将实验所需材料也放入超净台进行灭菌(血清、培养基除外)上海创赛科技提供Gibco RPMI 1640培养基，商品编号：C11875500BT-500ml，价格68元。
4)倒置显微镜下，观察细胞的状态，是否已经长满培养瓶，需要进行分瓶。
实施工作：
1)关闭超净台的紫外灯，打开风机。
2)点燃酒精灯，取出刻度吸管，在火焰上略烧，然后，安上吸球待用。
3)在打开培养瓶之前，用酒精棉球擦拭瓶盖，打开后，瓶口在酒精灯上过火焰，再用吸管轻轻吸出旧的培养液，注意，吸管不要碰到布满细胞的培养瓶的侧壁。上海创赛科技提供250ml一次性细胞培养瓶(标准型)表面处理，商品编号：C81-TCF011025-12.5cm²，滤膜盖200只/箱，价格672元。
4)将胰酶加入培养瓶内,显微镜下随时观察，见到细胞的突起消失，变圆时，立即翻转培养瓶，吸出胰酶。记住不要消化时间过长，否则，细胞会被胰酶消化掉。上海创赛科技提供胰酶，Pancreatin，USP级，8049-47-6，商品编号：C16-P10849-50g，价格85元。
5)加入适量Hanks液或培养基清洗一遍，立即倒掉。
6)加入含有10%血清的培养基，用吹打管吹打，一定要轻轻吹打，使其从瓶壁上脱落分散到培养基中，再补加培养基，按1:3进行分瓶。然后，用火焰烧培养瓶的瓶口和盖，再盖好培养瓶的盖，放到培养箱中进行培养。
以上介绍的是贴壁细胞的传代培养方法，对于悬浮细胞的传代培养方法，只需要将细胞进行离心，1000 rpm，5 min,然后，换入新的培养基即可。再分装到不同的培养瓶中进行培养。
不健康的细胞质中有空泡，细胞内有颗粒样物质，细胞间空隙增大，变形，不规则，失去原有的特点。
实验注意：
传代或换液24~ 48 h注意观察细胞是否被污染，污染的细胞培养液变浑浊，镜下可见有大量菌丝。如果细胞生长缓慢，生长特性改变，胞质内颗粒性物质增多，尽管培养液不变浑浊，考虑可能有支原体污染。污染的细胞立即从培养箱中取走，以免污染其它细胞。
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