(一)转移印迹
1.转移前准备:将滤纸,硝酸纤维素膜(NC)剪成与胶同样大小,NC 膜浸入蒸馏水中10-20min 后浸入转移buffer 中平衡30min 。
2.凝胶平衡:将电泳后的SDS-PAGE胶板置于转移buffer 中平衡30-60min。
3.按图操作:逐层铺平,各层之间勿留有气泡和皱折。
4.开始转移,连接正负极,盖好盖子,接上电源,恒流0.8mA/cm,室温下转移1h,转移后的凝胶再用氨基黑10B染色液染色20min ,然后脱色检测转移效果。
(二)免疫染色
1.转移后的NC膜于5%脱脂奶粉中封闭,4℃过夜。
2.TBS洗膜1-2次,10min/次。
3.加HRP标记的抗体,室温1h 。
4.TBS洗3次,10min/次。
5.NC膜再转入DAB显色液中,置暗处反应,待显色反应达到最佳程度时,立即用三蒸水洗涤终止反应。
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