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第七届图书馆 体育教师课题研修班

人外周血白细胞DNA的制备

教育装备采购网 2017-02-21 10:24 围观691次

  【基本原理】

  从全血中制备白细胞DNA,可用水直接破裂血中红细胞和白细胞的细胞膜及核膜,释出血红蛋白、细胞核;再用KI 裂解细胞核并溶解DNA;最后用酚/氯仿除去蛋白质,加无水乙醇使DNA沉淀,经A260/A280检测DNA含量,再经琼脂糖电泳鉴定。

  【器材】

  1.离心机

  2.紫外分光光度计

  【试剂】

  1.5mmol/L KI:8.3g KI加H2O到10ml

  2.0.9% NaCl

  3. 氯仿/异戊醇(24:1)

  【操作步骤】

  1.取200μl抗凝血,加入1ml 水。

  2.8000rpm离心5min,弃上清。

  3.沉淀中加入40μl 5mol /L KI,旋涡振荡30Sec。

  4.加入200μl 0.9% NaCl,然后再加入300μl氯仿/异戊醇,振荡30Sec。

  5.10 000rpm离心5min。

  6.小心吸取上清液,加入冷无水乙醇1ml。

  7.10 000rpm离心5min,弃无水乙醇。

  8.DNA 样品自然干燥。

  9.加适量的H2O或TE溶解DNA。

  10.核酸定量测定和电泳鉴定。

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