教育装备采购网
河南大学体育论坛580*60 第六届图书馆论坛580*60

防止免疫组化切片干燥的新方法

教育装备采购网 2017-08-23 14:15 围观712次

  防止免疫组化切片干燥的新方法

  为防止免疫组化切片干燥,我们经过反复摸索,总结出在清洗缓冲液中加入表面活性剂吐温20(Tween-20)防止干片的方法,已使用2年余,效果良好。现介绍如下。

  1、材料与方法

  1.1材料

  PBS磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.2~7.4)、Tween-20、500ml容量瓶和吸水纸。

  1.2方法

  取500ml已配制好的PBS磷酸盐缓冲液置容量瓶中,向瓶中加入2~3滴Tween-20,充分混匀。对10张不同组织的切片按照免疫组化染色步骤行常规PBS磷酸盐缓冲液清洗切片后,将切片置入配制好的PBS-Tween-20缓冲液中,上下提拉几次,让其均匀覆盖在整张切片上,再用吸水纸擦去周围多余的液体,放入湿盒中,即可滴加试剂进行下一步操作。为了防止边缘效应的发生,要求距组织边缘<2mm处擦拭,同时用蜡笔及牙签方法处理10张对照片。

  2、结果

  使用蜡笔组有2例在抗体孵育过程中组织边缘干燥,发生了边缘效应,而加入Tween-20组均未发生边缘效应,染色更加均匀。加入Tween-20的缓冲液能够更好地防止切片干燥。

  3、讨论

  免疫组化染色中,切片干燥会使抗体与组织发生非特异性结合,造成假阳性。尤其组织边缘,如果抗体覆盖不充分容易发生干片,造成非特异性染色,即“边缘效应”[1]。过去常用的方法是使用蜡笔和湿盒,由5蜡笔使用起来比较麻烦,需要经常更换,现多数单位使用专用的免疫组化油笔。使用蜡笔或免疫组化油笔都只能防止滴加的试剂不向四周流失,如果组织偏大就无法保证一次性将滴加的试剂完整覆盖整个组织,需要借助其他工具(如牙签等)将抗体覆盖全部组织,这样就增加了免疫组化操作的复杂性,还有可能导致抗体覆盖不均增加干片的可能性。Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物。由于其分子中有较多的亲水性基团(聚氧乙烯基),故亲水性强,具有乳化、扩散、增溶、稳定等性能,是一种常用的非离子性去垢剂和表面活性剂,对人体无害,无刺激性,常用为医药品的乳化剂、扩散剂和稳定剂。将切片浸入其中能够均匀覆盖整张切片,如同在切片上增加了一层液体膜,不会使组织和切片空白区形成明显的分界线,用吸水纸在离组织边缘<2mm处擦拭后,缓冲液能够在组织周围形成一个很清楚的界限,此时滴加的试剂能够很均匀地分散在所有组织上,让整张切片染色均匀。由于缓冲液的表面张力作用,被封住的试剂不会向四周流散,且能够在组织上残留相对较多的缓冲液,更好地防止了干片的发生,避免造成边缘效应。另外,由于Tween-20是去垢剂,也能够让组织切片清洗得更干净,避免了非特异性染色的发生。该方法在本实验室已使用2年余,做过多次与不加Tween-20液的对照实验,发现Tween-20对免疫组化染色结果无影响,可以放心使用。且PBS-Tween-20缓冲液配制方法简单,一般实验室均能完成操作;价格便宜,节约了医疗成本并易于推广应用。

  参考文献:

  [1]周晓鸽。免疫组化染色过程中存在的问题及对策[J]。诊断病理学杂志,2004,1(4):211-213.

点击进入上海科汇生物技术有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购网 作者:科汇生物技术 责任编辑:云燕 我要投稿
校体购终极页

版权与免责声明:

① 凡本网注明"来源:教育装备采购网"的所有作品,版权均属于教育装备采购网,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用。已获本网授权的作品,应在授权范围内使用,并注明"来源:教育装备采购网"。违者本网将追究相关法律责任。

② 本网凡注明"来源:XXX(非本网)"的作品,均转载自其它媒体,转载目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,且不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。

③ 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

九牧