石蜡切片(paraffin section) 是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片HE染色(常规HE染色)步骤:
(1)二甲苯Ⅰ:5~10min;
(2)二甲苯Ⅱ:5~10min;
(3)无水乙醇Ⅰ:1~3min;
(4)无水乙醇Ⅱ:1~3min;
(5)95%乙醇Ⅰ:1~3min;
(6)95%乙醇Ⅱ:1~3min;
(7)80%乙醇:1min;
(8)蒸馏水:1min;
(9)苏木精液染色:5~10min;
(10)流水洗去苏木精液:1min;
(11)1%盐酸-乙醇:1~3s;
(12)稍水洗:1~2s;
(13)返蓝(用温水或1%氨水等):5~10s;
(14)流水冲洗:1~2min;
(15)蒸馏水洗:1~2min;
(16)0.5%伊红液染色:1~3min;
(17)蒸馏水稍洗:1~2s;
(18)80%乙醇:1~2s;
(19)95%乙醇Ⅰ:2~3min;
(20)95%乙醇Ⅱ:2~3min;
(21)无水乙醇Ⅰ:3~5min;
(22)无水乙醇Ⅱ:3~5min;
(23)石炭酸-二甲苯:3~5min;
(24)二甲苯Ⅰ:3~5min;
(25)二甲苯Ⅱ:3~5min;
(26)二甲苯Ⅲ:3~5min;
(27)中性树胶封固。
注:上述(12)和(13)项可省去,但(14)的冲水时间须延长至10~15min(细胞核显示更清晰);(23)项可用无水乙醇代替,北方地区可省略。
说明:石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日,但标本可以长期保存使用,为永久性显微玻片标本。