四月,总是一个充满魔力的时节。花都开的缤纷艳丽,恨不得把世界妆扮成粉红色的新娘。枯树竟也爆出新芽,绿的活力四射。今天上海恒远小编带您了解实验中的小知识:双抗体夹心法实验原理及实验步骤!希望您会喜欢!
双抗体夹心法(常用于测定抗原)实验原理:
用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。
双抗体夹心法实验步骤:
一、材料准备:
1. 实验材料:血清、血浆、体液
2. 实验仪器:酶标比色计、96 孔板、移液枪、离心管、离心管盒
3. 所需试剂及试剂盒:碳酸盐包被缓冲液、抗体球蛋白、吐温-20、柠檬酸、硫酸
二、实验操作方法:
1. 包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度(1~10 μg /ml),每凹孔加 0.3 ml,4℃ 过夜,或 37℃ 水浴 3 小时,贮存冰箱。
2. 洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次,每次 5 分钟。
3. 每凹孔加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本,37℃ 作用 1~2 小时。
4. 洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次,每次 5 分钟。
5. 加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液,37℃ 作用 1~2 小时或由预试实验确定作用时间。
6. 洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含 0.05% 吐温-20)洗 3 次,每次 5 分钟。
7. 加入 0.2 ml 底物溶液于每个凹孔(OPD 或 OT),室温作用 30 分钟(另作一空白对照,0.4 ml 底物加 0.1 ml 终止剂)。
8. 加终止剂:每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 柠檬酸 0.05 ml。
9. 观察记录结果:目测或用酶标比色计测定(OPD 用 492 nm)OD 值。
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