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液相氧电极应用-氧电极测定小麦胚呼吸活性

教育装备采购网 2018-04-23 09:14 围观664次

  氧电极测定小麦胚呼吸活性

  实验准备:

  仪器器具:Oxytherm氧电极系统一套;剪刀,双面刀(或单面切刀或者手术刀),1ml移液器,镊子,吸管,吸水纸,烧杯3个

  试剂:测定介质50mmol/L pH7.5的Tris-HCl缓冲溶液。称取6.05克Tris(三羟甲基氨基甲烷) 800~900ml水中,滴加1mol/L HCl,调pH7.5,加水1000ml。除此之外,测定介质还可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的缓冲液。

  实验步骤:

  1准备好所需的仪器和试剂,安装好氧电极,并与计算机连接,校正(详细操作步骤见厂家提供的说明书或汉语说明书),校正结束后加入2mL缓冲液,开启转子,走基线(看基线是否稳定,测定前必须保证基线稳定)。

  2均匀选取十个小麦种子,用手术刀切下胚

  3将反应杯中的缓冲液吸出,重新加入2mL缓冲液,将切下的胚放入反应杯中,测定曲线如下:

  4测定十分钟后,呼吸速率稳定下降,用软件计算曲线的斜率(呼吸速率)。假设曲线斜率为A。

  5测定结束后,将样品吸出,清洗反应杯,重新加入小麦胚,重复步骤3

  6小麦种子胚呼吸速率的计算:

  呼吸速率Sr(umol O2/Per*s)=曲线斜率A(umol O2/ml*s)*2ml = A/300(umol O2/Per*s)

  注:假设曲线斜率为A;Per表示每个胚

  注意事项:

  1首先参考氧电极使用注意事项

  2测定胚活性时只需要切下胚,不需要测定整个种子,种子中只有胚有活性

  3选取小麦种子要均一饱满,每次测定数量一致

  可以完成该实验的仪器有:Oxygraph; Oxytherm; Chlorolab-2

  

点击进入北京英驰科技有限公司展台查看更多 来源:教育装备采购网 作者:英驰科技 责任编辑:张肖 我要投稿
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