麦胚凝集素（WGA）elisa操作步骤

　　麦胚凝集素（WGA）elisa操作步骤本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中麦胚凝集素（WGA）含量。

　　实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中麦胚凝集素（WGA）水平。用纯化的麦胚凝集素（WGA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入麦胚凝集素（WGA）抗原，再与HRP标记的麦胚凝集素（WGA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的麦胚凝集素（WGA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中麦胚凝集素（WGA）抗原浓度。

　　试剂盒组成：

试剂盒组成	48孔配置	96孔配置	保存
说明书	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1个	1个
酶标包被板	1×48	1×96	2保存
标准品：72μg/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2保存
标准品稀释液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2保存
酶标试剂	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2保存
样品稀释液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2保存
显色剂A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2保存
显色剂B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2保存
终止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2保存
浓缩洗涤液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2保存

　　标本要求：

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于保存，但应避免反复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　操作步骤：

　　1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为48μg/L，32μg/L，16μg/L，8μg/L，4μg/L）。

　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置温育30分钟。

　　4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，避光显色15分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　注意事项：

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。