单细胞可视化分选系统——isoPick
isoPick是英国iotaSciences公司推出的超温和细胞处理平台，是低剪切力、高通量、高度自动化的可视化单细胞分选系统。该设备依托界面张力重塑细胞培养基（或干细胞包被层），可在6 cm的细胞培养皿上构建256个独立单细胞微腔；随后以纳升级体积自动化完成细胞分配，将单个细胞分选到各个微腔室。isoPick配套的成像系统可清晰观测单细胞微腔内细胞状态，依托实时光学成像信息，保证分选的单细胞实现100%单细胞纯度。
isoPick Lite为iotaSciences公司最新推出的经济型单细胞分选系统，面向低通量实验需求、已配备成像平台的实验室，适配基因编辑、单细胞组学等前沿研究方向。机型兼容多种下游收集载体，能够灵活将单细胞转移至96孔板、PCR管、液质联用样品瓶，适配多元化检测工作流程。突出优势为无边缘效应，内置全自动液体处理单元，规避人工操作引入的误差，保障实验结果具备出色的重复性与一致性。
设备特点
- 全自动化流程
- 操作简单，对细胞无损伤
- 结果可追踪
- 直接转移到PCR管或96孔板
- 结构紧凑，体积小
传统单细胞分离手段无法保证所得的样品内只有一个单细胞，有可能有多个细胞或细胞团，导致下游的实验出现误差。isoPick采用的GRID技术结合图像信息分析，结果可追踪，保证准确的单细胞分选。而且isoPick分选条件温和，可以显著提高分选单细胞的存活率。同时isoPick可将单细胞样品按照特定的体积直接转移到96孔板或PCR管中，无缝衔接单细胞下游应用，确保后续单细胞组学信息完整性。
应用领域
部分用户单位
部分应用案例
人类诱导多能干细胞(hiPSCs)的单细胞克隆
人类诱导多能干细胞(hiPSCs)构建单克隆细胞系培养步骤繁琐，细胞对异常的处理和操作非常敏感，传统单细胞分选容易导致细胞和遗传毒性应激的积累，进而导致不良分化和多能性丧失。
使用isoPick可以温和、自动地将人类诱导多能干细胞(hiPSCs)进行单细胞分选，以培养hiPSCs单克隆细胞系，显著提高了细胞分离与克隆效率。
K562细胞单细胞测序
传统单细胞测序需对单细胞进行全基因组扩增（WGA），但传统单细胞WGA受限于如何获得单个细胞并转移到小体积的WGA反应中。
使用isoPick自动将K562细胞拾取并转移至含3.5 µl scWGA试剂的PCR管中，并无缝衔接scWGA反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示（下图），单细胞WGA的DNA样本(+)中两种基因均被特异性扩增，而阴性对照(-)没有这两种扩增产物，符合预期。
对人类诱导多能干细胞 (hiPSCs) Prime 编辑构建工程细胞系
Prime 编辑可在 HEK3 基因座中精确插入三个核苷酸，用于构建工程细胞系hiPSCs。通过引入靶标特异性 pegRNA 来编辑单个或多个基因组位点，以进行精确有效的基因组编辑，促进疾病建模和功能遗传学研究。
Prime 编辑使用与逆转录酶融合的 Cas9 切口酶，将 DNA 序列从“Prime 编辑”引导 RNA (pegRNA) 复制到特定基因座。通过Prime 编辑将多西环素诱导型 Prime Editor 蛋白 (PE2) 整合到 iPSC 细胞系的AAVS1 基因组，之后使用isoPick分选转入靶基因的hiPSCs细胞系，以确保细胞的单克隆性。（见上图）
该研究使用isoPick来确保工程细胞系的单克隆性与准确性。
参考文献：Bharucha N, Ataam J A, Gavidia A A, et al. Generation of AAVS1 integrated doxycycline-inducible CRISPR-Prime Editor human induced pluripotent stem cell line[J]. Stem Cell Research, 2021, 57: 102610.
胶质母细胞瘤（GBM）通过表观遗传免疫编辑获得骨髓相关转录程序以引发免疫逃逸
研究人员通过将多形性胶质母细胞瘤干细胞 (GSC) 连续移植到免疫活性宿主中，发现 GSC 通过建立增强的免疫抑制肿瘤微环境来免疫逃逸。从机制上讲，GSC通过表观遗传免疫编辑过程引起，其在免疫攻击后强制执行 GSC 中稳定的转录和表观遗传变化。研究中使用Irf8敲除细胞系实验证明，Irf8的是细胞免疫逃逸的一个重要因素，且在体内可能通过IFNγ介导的发生。该研究使用isoPick构建Irf8克隆敲除系。
参考文献：Gangoso E, Southgate B, Bradley L, et al. Glioblastomas acquire myeloid-affiliated transcriptional programs via epigenetic immunoediting to elicit immune evasion[J]. Cell。
