什么是引物（Primers）？
引物是聚合酶链反应（PCR）技术中使用的短单链DNA序列。在PCR方法中，使用一对引物与样品DNA杂交并确定将被扩增的DNA区域。引物也被称为寡核苷酸（Oligonucleotides）。
引物具备哪些特性？
引物的主要特性是需要与模板分子上的序列相对应（需要与模板链互补）。
引物有长短之分。短引物主要用于扩增小而简单的DNA片段，而长引物用于扩增真核基因组DNA样本。引物不宜过长（>30-mer primers）或过短。过短的引物会产生不准确的非特异性DNA扩增产物，过长的引物会导致杂交速率降低。平均而言，需要扩增的DNA片段大小应该在1-10KB以内。
引物结构要相对简单，不含内部二级结构，避免内部折叠。同时，还需要避免“Primer-Primer”退火（Annealing），这种退火会产生引物二聚体（primer dimers）并破坏扩增过程。设计时，如果不确定要在引物的某个位置放置什么核苷酸（nucleotide），可以在该位置包括多个核苷酸，称为混合位点（mixed site）。也可以使用基于核苷酸的分子插入物（肌苷，inosine）来代替常规核苷酸，以实现更广泛的配对能力。
18-24个碱基的长度；
G/C含量在40-60%
起止于1-2G/C对；
熔化温度（Tm）为50-60℃；
引物对之间的Tm应在5℃之内；
引物对不应该有互补区域。
Step 1 粘贴引物序列
点击Primers→Add Primer...然后复制粘贴序列。
Step 2 选择绑定位点（可选）
或者，可以从在序列上选择所需的绑定站点开始。点击鼠标并拖动以进行选择，相应引物的熔化温度就会显示出来。在所选位置添加引物，Primers→Add Primer。
Step 3 选定底链或顶链（可选）
若引物是从选定的结合位点制成的，需要指定是选择Top Strand还是Bottom Strand。
Step 4 引物命名
如有需要，可以为引物命名，方便后续管理。
Step 5 输入描述
如有需要，可以输入详细描述。Description页签是默认打开的。
Step 6 修改引物
如需要，可以修改引物以增加一个5'扩展或引入突变。SnapGene提供两种方法：
一种是在文本框中手动编辑引物序列；
另一种是在变更位置单击引物序列，然后单击Insertions选项卡。使用对话框控件添加所需的密码子、限制位点、或肽编码序列。
Step 7 查看结合部位和熔化温度
结合位点的数目和计算的熔化温度显示在窗口的底部。点击对话框右下角的蓝色文本，可以看到熔化温度计算方法的总结。
Step 8 查看引物
点击Add Primer to Template可以查看新的引物。
Step 9 选择多个引物
如要批量编辑多个引物，先选中目标引物。打开Edit Primers对话框，点击Primers→Edit Primers。
Step 10 确认改动点
如上图选择想要修改的引物颜色、磷酸化、和字体、然后点击OK。
Step 11 查看更新的引物
可以看到更新后的引物，如上面序列视图举例，引物的颜色被更改为红色。
而在上面Map视图中，可以看到更新颜色后的引物有圆点标记。
