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瘦肉精及其测试方法、检测仪器总结简介

教育装备采购网 2011-03-28 19:38 围观665次

  教育装备采购网讯:自央视3·15曝光双汇瘦肉精猪肉以来,引起广泛关注,“瘦肉精”成为网络搜索的热门词汇,也一直是大家关注的民生问题。

  瘦肉精是一类动物用药,将瘦肉精添加于饲料中,可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。在中国,通常所说的“瘦肉精”则是指克伦特罗,它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘,后由于其副作用太大而遭禁用。目前,能够实现这种功能的物质是一类叫做β-受体激动剂的药物,例如莱克多巴胺和沙丁胺醇等,同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大,因而造成安全隐患。它们也因而在全球遭到禁用。分子式:C12-H18-Cl2-N2-O。白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,熔点161℃,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚。

  瘦肉精按照GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定方法进行检测。常见的检测方法有以下几种:

  气相色谱-质谱法(GC-MS)

  GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来,能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析,而且具更高的检测极限。另外,GC-MS法与HPLC法相比,检测灵敏度更高,假阳性率更低。因此,我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法(NY/T468~2001)。

  岛津上海分析中心推出了基于GC -MS法的克伦特罗检测方案。GC-MS法具有灵敏度高、假阳性率低的特点,常用作筛选后阳性样品的确证。本方案针对盐酸克伦特罗的化学性质,建立了C18小柱和聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整体柱二维萃取的方法。样品提取后,用C18小柱和聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整体柱进一步富集净化,经N ,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) 衍生,选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。该方法以克伦特罗同位素(Clenbuterol-D9) 为内标,内标法定量。猪肉中克伦特罗的检出限为0.13 μg/kg,在0.5~50 μg/kg的浓度范围内具有良好的线性关系,r大于0.999。日内、日间相对标准偏差不高于20%,加标回收率大于75%。结果表明,该方法简单、快速、灵敏度高、重现性好,适用于猪肉中克伦特罗的测定。

  高效液相色谱法(HPLC)

  HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物,而且,HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用,容易实现分析过程的自动化。目前,我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法,最低检测限范围为1~15ng/g,其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高,而且假阳性率低;缺点是样品处理时间长,检测。

  禾工科学仪器推出STI5000系列液相色谱仪(HPLC)检测肉制品中瘦肉精。本方法在猪的肌肉和肝脏组织中的检测限为0.001ug/g’回收率范围为80%±20%。

  酶联免疫吸附法(ELISA )

  利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用,通过化学方法将植物辣根过氧化物酶(HRP)与克伦特罗(CL)结合,形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体(羊抗兔IgG抗体)与特异性的抗克伦特罗抗体结合,然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗,它们竞争性与克伦特罗抗体结合,洗涤后加底物,根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多,则被结合的酶偶联克伦特罗少,有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量,比色的最佳波长为450 nm,参比波长应大于600 nm。酶联免疫吸附法(ELISA)具有检测速度快、灵敏度高的特点,适用于现场定性快速检测。

  适合进行瘦肉精检测的酶标仪型号—Biochrom Anthos zenyth 340rt 酶标仪

  推荐理由:

  波长范围:340-750nm---满足测定需要的波长范围

  读数范围:0.000-4.000 OD—满足读数结果范围

  读板速度:18秒/96孔—检测速度快

  控温范围:室温+4-45℃--试剂盒最佳反应温度为25℃,带有控温功能的酶标仪可以使读数结果更加准确

  震荡模式:3种速度—满足需要震荡使反应进行的更加充分,结果更加准确

  标配滤光片:340、405、450、492、620nm—满足测量波长450nm和参比波长620nm,还可以进行紫外检测

  内置软件:ADAP Basic软件—可储存和输出结果,满足数据处理

  胶体金免疫层析法(Colloidal gold immunochromatography)

  利用竞争法胶体金免疫层析技术,检测液中的Clen与金标垫上的金标抗体结合形成复合物,若Clen在检测液中浓度低于灵敏度值,未结合的金标抗体流到T区时,被固定在膜上的Clen-BSA偶联物结合,逐渐凝集成一条可见的T线;若Clen浓度高于灵敏度值,金标抗体全部形成复合物,不会再与T线处Clen-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生,即试纸有效.

  盐酸克仑特罗(瘦肉精)快速检测卡(操作方便快捷,市民自己就可以操作)采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。试剂含有被预先固定于膜上检测带(T)的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。检测限为3ng/ml(3ppb)。

  液相色谱—质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)

  参见SN/T 1924—2007 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法。

  本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。

  试样中的药物残留采用pH5.2的乙酸铵缓冲液提取,同时加入β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶进行酶解后,提取液经C18和SCX双SPE柱净化,液相色谱—质谱进行测定,内标法定量。

  过程烦琐、难于操作,需贵重仪器,在实际应用中受到一定的限制。

  近期,岛津推出联用超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8030测定猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的方法。

  使用岛津超高效液相色谱串联质谱联用法检测猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的方法,首先,在样品经提取后,用超高效液相色谱LC-30A快速分离,三重四极杆质谱仪LCMS-8030进行定量分析。本方法分析速度快,精密度良好,线性范围宽(0.05~100 ng/mL),校准曲线的相关系数在0.999以上。方法定量限满足国标0.5 μg/kg的要求,并且对于猪肉中克伦特罗的检测方法定量限可以达到0.05 μg/kg,检测灵敏度完全符合日本肯定列表的要求。

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