瘦肉精（克伦特罗CLB）的多种检测方法

　　瘦肉精是一类药物，而不是一种特定的物质，是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做β-兴奋剂(β-agonist)的药物，比如在中国造成中毒的克伦特罗(clenbuterol)和美国允许使用的雷托巴胺(Ractopamine)。在中国，通常所说的“瘦肉精”则是指克伦特罗。它曾经作为药物用于治疗支气管哮喘，后由于其副作用太大而遭禁用。

　　中文名：瘦肉精;克伦特罗;学名盐酸克伦特罗;是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。盐酸双氯醇胺;克喘素;氨哮素;氨必妥;氨双氯喘通;氨双氯醇胺。

　　英文名：CLENBUTEROL

　　CAS: 37148-27-9

　　理化特性：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

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　　检测方法

　　1、气相色谱-质谱法(GC-MS)

　　GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g;Pteer Batioens应用气相色谱-串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g;刘琪等用GC-MS法(EI离子源)检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL;VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法(NY/T468~2001)。

　2、高效液相色谱法(HPLC)

　　HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。黄士新等(1995)应用紫外检测器，在λ=243nm，色谱柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱温：室温30℃的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留，最低检测限可达2ng/g[4]。国外有人应用HPLC (二极管阵列检测器)测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为1.26ng/g，回收率达98.9%[5]。目前，我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低;缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。

　　3、酶联免疫吸附法(ELISA )

　　利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学方法将植物辣根过氧化物酶(HRP)与克伦特罗(CL)结合，形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体(羊抗兔IgG抗体)与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶偶联克伦特罗少，有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450 nm，参比波长应大于600 nm。

　4、胶体金免疫层析法(Colloidal gold immunochromatography)

　　利用竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中的Clen与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若Clen在检测液中浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体流到T区时，被固定在膜上的Clen-BSA偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线;若Clen浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处Clen-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生，即试纸有效.

　　检验方法

　　1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温。

　　2. 撕开铝塑袋，取出试纸。

　　3. 依据型号进行操作(尿液不得直接浸湿观察区)。

　　3.1 将试纸白色一端浸入尿液中(液面不得超过横线)，保持5秒钟;

　　3.2 用滴管吸取待检样品尿液，逐滴缓慢加入3滴样品于加样孔中。

　　4. 将试纸平放1分钟，等待红色条带出现。

　　5. 3～8分钟内读取结果，10分钟后判读无效。

　　6. [1] 10分钟内可以检测出结果

　　结果判读

　　阳性( )：仅质控区(C)出现一条紫红色条带。在测试区(T)内无紫红色条带出现。

　　阴性(-)：两条紫红色条带出现。一条位于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)内。